Co wziąć pod uwagę przy wyborze odpowiedniego mikroskopu do systemu obrazowania żywych komórek

Aby pomyślnie przeprowadzić eksperymenty obrazowania żywych komórek, kluczowe jest użycie właściwego podejścia. Wybierając odpowiedni mikroskop do obrazowania żywych komórek, należy wziąć pod uwagę następujące aspekty: żywotność próbki, szybkość akwizycji obrazu (rozdzielczość czasowa) i wymaganą rozdzielczość we wszystkich trzech wymiarach.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 etykieta) i najniższa dawka światła powodująca pobudzenie mają kluczowe znaczenie.

W przypadku eksperymentów na żywych komórkach, wysoka prędkość akwizycji jest często krytyczna, w szczególności w przypadku badania szybkich procesów dynamicznych, takich jak obserwacja pęcherzyków. Stosowanie filtrów optycznych powoduje ograniczenia prędkości ze względu na konieczność sekwencyjnego obrazowania przy zmianie zestawów filtrów dla każdego koloru, używanych do badania interakcji wielu składników. Zbieranie obrazów sekwencyjnie wymaga więcej czasu niż jednoczesne zbieranie obrazów, w związku z czym szybkie ruchy próbki mogą zostać pominięte podczas akwizycji, ponieważ każdy kolor ma dłuższy odstęp czasu między jednym obrazem a następnym. Ponadto, gdy istotne jest bezpośrednie porównanie dwóch lub więcej kolorów, sygnały mogły się przemieszczać nawet między poszczególnymi akwizycjami fluoroforów, co komplikuje interpretację danych.

Dostępnych jest wiele technologii pozyskiwania obrazów w 3 wymiarach w czasie. Wybór systemu zależy od eksperymentu i tego, czy priorytetem przy pozyskiwaniu pożądanej rozdzielczości 3D jest większa prędkość lub mniejsze oświetlenie próbki podczas obrazowania. Wybór najbardziej odpowiedniego systemu tradycyjnie wymagał dokonania wyboru między systemem obrazowania żywych komórek opartym na kamerze lub konfokalnym, jednak nowoczesne rozwiązania mogą zapewnić obie modalności w sposób zintegrowany.